Thermo ND 2000微量分光光度计
NanoDrop 2000超微量紫外//可见分光光度计是NanoDrop的新产品,应用液体的表面张力特性,样品体积只需要0.5~2ul,在检测台上,经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材检测吸收值的优点。此产品设计受保护,并在广受欢迎,其准确度与便利性让科学家得以更有效率进行各项研究。
NanoDrop 2000使用高能量氙灯(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光谱检测,且不需要暖机,开机后立即使用。搭配高感度CCD array检测器,检测吸收值可高达300Abs(dsDNA浓度2~15000ng/ul),大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可检测。
待测样品的均质性是NanoDrop 2000的高要求,一般核酸、蛋白质样品能在检测前以vortex mixer震匀为虚好,若无vortex mixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomic DNA可能因前述动作而断裂,则改以55?C加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态,以确保2ul具有代表性。
检测时选择不同检测模式,可以得到快速的结果:
Nucleic Acid –吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸浓度。
UV-Vis – 190~840nm间所有波长的吸收值及光谱(以1mm光径吸收值呈现)。
A280蛋白质定量法– 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质,须具有已知的质量消光系数(mass extinction coefficient)方可计算。
BCA、Bradford及Lowry –依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果,自动画出标准曲线并计算R square,待测蛋白质浓度。
蛋白质检测模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三种常见定量呈色剂,因呈色剂随时间会逐渐加深,使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品,在快时间内完成检测,以得到良好的标准曲线。每个标准曲线多可有七个标准品,每个标准品多可做五重复。
测蛋白质时样品体积需使用2ul,每个样品检测后需以Kimwipes低尘擦拭纸(编号:34155)擦拭15~20回,以避免呈色剂与蛋白质的残留。
Thermo ND 2000微量分光光度计浓度范围:
样品种类 | 低浓度 | 高浓度 (超过时请稀释样品) | 再现性(五重复以上) |
核酸 | 2 ng/ul | 15000 ng/ul (dsDNA) 12000 ng/ul (RNA) | 浓度范围在 2-100 ng/ul 时,SD为 ± 2 ng/ul 浓度范围大于 100 ng/ul 时,CV为 ± 2% |
纯BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 浓度范围在0.05-10 mg/ml时,SD为± 0.10 mg/ml 浓度大于10 mg/ml时,CV为± 2% |
蛋白质,以BCA方式定量 | 0.2 mg/ml | 8.0 mg/ml | CV:± 2% (在可侦测的浓度范围内皆然) |
蛋白质,以modified Lowry方式定量 | 0.2 mg/ml | 4.0 mg/ml | CV:± 2%(在可侦测的浓度范围内皆然) |
蛋白质,以Bradford方式定量 | 100 ug/ml | 8000 ug/ml | 浓度范围在 100-500 ug/ml 时,SD为 ± 25 ug/ml 浓度大于 500 ug/ml 时,CV为 ± 5% |
蛋白质,以Mini Bradford方式定量 | 15 ug/ml | 100 ug/ml | 浓度范围在15-50 ug/ml时,SD为± 4 ug/ml 浓度大于50 ug/ml时,CV为± 5% |
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