蛋白质N/C端测序是解析蛋白质序列结构、揭示其功能机制的核心技术，广泛应用于生命科学、生物医药、临床诊断等领域。传统N/C端测序依赖艾德曼降解法或早期质谱技术，对样品需求量大（通常需微克级以上），且易受样品纯度、翻译后修饰影响，难以适配稀有微量样品（如临床活检组织、单细胞提取物、稀有生物样本）的检测需求，成为制约相关研究深入推进的关键瓶颈。近年来，随着测序技术的迭代升级，结合纳米孔检测、信号放大、质谱联用等创新手段，
蛋白质N/C端测序在微量样品检测中实现多项突破性进展，大幅降低样品需求量、提升检测精度与效率，拓展了测序技术的应用边界，以下结合技术革新与实际应用，详细阐述其核心突破点。
样品用量实现量级突破，从微克级降至皮克级，攻克稀有微量样品检测难题，是最核心的应用突破。传统艾德曼降解法测序需至少1-10μg纯化蛋白质样品，且测序过程中样品会逐步消耗，无法适配临床活检、单细胞等仅能获取皮克至纳克级样品的场景。借助信号放大技术与高灵敏度检测体系的融合，新型N/C端测序技术实现了样品用量的大幅缩减，目前主流技术可将样品需求量控制在10-100pg，部分高档技术甚至可实现单细胞水平（单个细胞含蛋白质约10pg）的N/C端测序，较传统技术样品用量降低100-1000倍。
这一突破主要得益于两大技术革新：一是基于纳米孔的单分子测序技术优化，如中科院化学研究所团队开发的主客体相互作用辅助纳米孔测序策略，通过胍环与多肽N端的特异性结合，延长肽段在纳米孔中的穿孔时间，提升信号分辨能力，可实现单分子水平的末端氨基酸序列读取；二是样品预处理技术的升级，采用微流控芯片实现微量样品的高效富集与纯化，去除杂质干扰，同时减少样品在预处理过程中的损耗，确保微量样品能满足测序需求，打破了“样品量不足无法测序”的局限。
检测精度与抗干扰能力显著提升，突破微量样品中翻译后修饰的检测瓶颈。微量样品往往伴随纯度低、杂质多、翻译后修饰复杂等问题，传统测序技术易出现信号失真、序列误判，尤其难以精准检测N/C端的磷酸化、乙酰化、糖基化等修饰位点，而这些修饰位点直接决定蛋白质的功能与活性。新型测序技术通过算法优化与检测技术联用，有效解决了这一难题。
在N端测序方面，优化后的自动化艾德曼降解法结合毛细管电泳检测，可精准捕捉微量样品的末端氨基酸信号，同时区分不同翻译后修饰类型；在C端测序方面，质谱联用技术与羧肽酶水解策略结合，通过逐步水解C端氨基酸并借助质谱检测其质量信号，可精准解析C端序列及修饰位点，弥补了传统C端测序难度高、精度低的短板。华西医院团队开发的NEPS技术，通过功能化纳米孔与机器学习算法结合，可直接区分全部20种天然氨基酸，还能识别翻译后修饰氨基酸，进一步提升了微量样品测序的精准度。
应用场景大幅拓展，覆盖生命科学、临床诊断、生物医药等多个领域的前沿研究。在临床诊断领域，该突破使得肿瘤活检、神经退行性疾病（如阿尔茨海默病）微量样本的N/C端测序成为可能，可通过检测蛋白质末端序列异常及修饰变化，实现疾病的早期筛查与精准诊断，例如通过测序脑脊液中微量异常淀粉样蛋白的N/C端序列，辅助阿尔茨海默病的早期诊断。
在生命科学研究中，单细胞水平的N/C端测序可揭示细胞异质性，解析不同细胞中蛋白质末端序列的差异的功能关联，为细胞分化、发育机制研究提供新的技术支撑；在生物医药领域，可对微量重组蛋白、抗体样品进行N/C端测序，精准验证蛋白序列完整性，保障生物制剂的质量，同时助力新型药物靶点的发现，如通过测序疾病相关蛋白的末端序列，筛选特异性结合位点。
此外，测序效率与便捷性的提升，进一步推动了微量样品测序的普及应用。传统微量样品测序流程繁琐、耗时久，需专业技术人员操作，而新型测序技术实现了流程自动化，可在数小时内完成微量样品的N/C端测序，且设备小型化、操作简化，无需复杂的样品预处理步骤，降低了技术门槛，让更多实验室能够开展微量样品测序研究。
蛋白质N/C端测序在微量样品中的应用突破，核心体现在样品用量缩减、检测精度提升、应用场景拓展三个方面，借助纳米孔单分子检测、质谱联用、信号放大等技术革新，打破了传统技术的局限，为稀有微量样品的序列解析提供了可靠的技术支撑。这一突破不仅推动了蛋白质测序技术的迭代升级，更助力生命科学、临床诊断、生物医药等领域的研究向更精准、更深入的方向发展，具有重要的理论意义与实际应用价值。
