热启动PCR（hot start PCR）概述

热启动PCR（hot start PCR）概述：

在传统的PCR反应中，反应体系各成分（Taq DNA聚合酶、dNTP 和引物等）均是一次加入并进入循环，在反应温度由室温（25℃）上升至高温（94～95℃）过程中，可能发生引物错配和二聚体的形成。引物与模板中一些非靶位点的错配和引物之间形成的二聚体，在Taq酶的作用下均可延伸，这些非特异性产物又可以在后面的PCR循环中继续扩增，使非特异性产物不断积累，同时，也消耗反应体系的各成分，终PCR扩增的特异性产物大大减少。热启动PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR。通过这种方式控制PCR反应的必须组分DNA聚合酶，直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后，再启动PCR达到有效扩增特异性PCR产物的目的。

*UNG酶通常和热启Taq酶一同用于建立含有UNG/dUTP防污染体系的热启动PCR反应系统。

UNG酶(Uracil-N-glycosylase，-N-糖基化酶)的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除。UNG酶的佳活性温度为50℃，95℃灭活。作用：为保证PCR结果的准确性，要预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG酶（Uracil-N-Glycosylase）和Taq 酶热启动。PCR反应常见，重要的污染物是PCR产物，防污染热启动PCR试剂盒以dUTP取代dTTP，所以PCR产物都是含有dU的DNA链。在PCR开始前增加50℃的保温步骤，UNG酶即可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的碱基降解，并在随后变性这步的条件下DNA链断裂，消除由于污染DNA产生的扩增，从而保证扩增结果的特异性，准确性。