2026年03月21日 11:22:03 来源:上海普赫光电科技有限公司 >> 进入该公司展台 阅读量:16
纳米技术 GSDIM (其次是个别分子返回基态枯竭显微镜) 提供详细的图像的蛋白质和其他生物分子在细胞内的空间布局。帮助向更多的研究实验室和成像中心的用户提供的GSDIM 技术市场上个商业系统 (徕卡 SR GSD) 是现在。利用超分辨率 GSDIM显微镜,细胞隔间和地区,如纤毛或单一的蛋白质,与他们互动的伙伴可以成像分辨率低于衍射极限,即在两位数纳米的范围,使得科学家们能更多地了解细胞内复杂的相互作用。时间,在这方面的知识可能导致更好的理解细胞以前无法的疾病的原因。
在传统的荧光显微镜中一种荧光染料的离域的 π 电子从地面状态 S0 转移到一种兴奋状态 S1。当他们回到基态 S0 振荡,他们发出的荧光光。GSDIM 技术,降低了通过切换到黑暗的状态 (图 1) (Fölling et al.,2008 年,Bierwagen et al.2010年,种皮 et al.,2010年) 大部分的荧光染料在此振荡周期中涉及的电子数目。这减少了可激发荧光团的数量,直到可以检测到单分子。单分子然后自发地从黑暗状态返回一个易激动的地面状态并发出荧光,而其他人都通过切换到黑暗状态再次停用。其结果是,荧光分子点亮或试样中"作祟"。单个荧光团的确切位置可以通过一种算法确定。所有的荧光团的位置信息收集在数千个单独的图像,其坐标用来计算超分辨率 GSDIM 图像。GSDIM 图像中所示的结构因此起源方式类似的流水账风格的绘画。
图 1: 基于一个简化的雅布伦斯基图的 GSDIM 方法的示意图。离域的 π 电子的荧光团可以是,例如,在地面状态 S0,在兴奋状态 S1 (既所谓的国家) 或三重态或激进黑暗状态 (这两个 OFF 状态)。当发出荧光光时,电子和流通,地面兴奋的状态。这些方面与国家不同,在关闭状态下的荧光团都不能够发出的光。这些 OFF 状态通常的使用寿命长,但他们是很难达到,由于国米系统过境所需。通过设置右环境条件嵌入介质中和通过的标准荧光免疫荧光为聪明的选择,有可能到可逆开关荧光团通过令人兴奋的他们与的光强度。当足够的分子在关闭状态下,有可能来检测样品中的个别分子。
图2:超分辨率gsdim显微镜和激光共聚焦显微镜比较。A:gsdim显微镜(徕卡SR GSD),MDCK细胞培养在盖玻片,固定和染色anti-centrin-2 / A488和反α微管蛋白/ alexa647。在基体区微管蛋白和Centrin-2标签的半圆形结构(箭头)。规模:1µM。B:激光共聚焦显微镜(徕卡TCS SP2)扫描的顶端区域的MDCK细胞的免疫组化染色的anti-centrin-2 / A488和抗-galectin一3 / alexa546。核酸的细胞用Hoechst 33342染色。X / Y图像(上)再次显示了新月形的结构,也包含Centrin-2 Centrin-2的具有约束力的合作伙伴,Galectin-3(箭头)。X / Z图像清楚地显示这些结构位于顶部以上的细胞核。规模:1µM.