潮霉素B Hygromycin B类型
我司提供两种产品形式的潮霉素B。
一种以冻干粉形式提供，货号分别为：MS0003-1G，MS0003-5G，MS0003-10G。需要配制成储存液后备用。
一种以溶于PBS的无菌液体形式提供，货号为MS0003-20ML，使用更简单方便。
潮霉素B Hygromycin B产品特性
1)化学名：O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1-2-3)-O-β-D-talopyranosyl(1-5)-2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine
2)同义名：Hygromycin B,from Streptomyces hygroscopicus潮霉素质B，来源于吸水链霉菌
3)CAS NO：31282-04-9
4)分子式：C20H37N3O13
5)分子量：527.53 g/mol
6)外观：类白色至白色粉末
7)纯度：≥90%(HPLC)
8)效价：≥1050 U/mg
9)化学结构：
1、储存液制备
1)潮霉素B(粉末形式)：称取适量粉末溶于1×PBS配制成50mg/ml溶液，用0.22μm滤膜过滤除菌，置于2-8°C避光保存。
2)潮霉素B(溶液形式)：已是无菌储存液，直接用细胞培养液稀释到工作浓度即可使用。
2、建议工作浓度
潮霉素B用来筛选稳定转染细胞株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化。1)哺乳动物细胞使用浓度为50-1000μg/ml，常用筛选浓度为200μg/ml，zuijia浓度需要杀灭曲线来确定2)植物细胞常用浓度：20-200μg/ml；
3)细菌常用浓度：20-200μg/ml；
4)真菌常用浓度：200-1000μg/ml；
3、杀灭曲线的建立
建议初次实验一定要建立杀灭曲线(kill curve)，至少设立5个浓度，筛选到适合自身实验体系的zuijia浓度。
1)将未转化细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃培养过夜；【注意】：对于需要更高密度以保证活力的细胞，增加接种量。
2)第二日，用含梯度浓度潮霉素B的培养基替换旧培养基。比如，哺乳动物细胞常用浓度为50-1000μg/ml，可设50,100,250,500,750,1000μg/m这6个浓度，各3个平行。同时设置一阴性对照，3个平行。
3)接下来每3-4日更换新鲜的含抗生素培养基。
4)按照固定周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转化细胞生长的恰当浓度。选择在理想天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选所需的工作浓度。
4、稳转细胞的筛选
1)转染48h后，用含zuijia筛选浓度潮霉素B的培养基进行细胞传代。【注意】：细胞处于活跃状态时抗生素的杀伤效果。当细胞密度过高，筛选效率会降低。为了得到较好的筛选效果，建议将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每3-4日更换新鲜的含抗生素培养基。
3)筛选7天后观察并评估细胞集落的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这些取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取5-10个抗性克隆到35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后换用正常培养基培养即可。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Hygromycin B潮霉素B
产品标签
Hygromycin B潮霉素B；50mg/ml；Hph潮霉素磷酸转移酶；遗传霉素G418；Blasticidin S杀稻瘟菌素(灭瘟散)；CAS：31282-04-9
产品描述
潮霉素B(Hygromycin B)，从吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分离到的一种氨基糖苷类抗生素。通过与30S核糖体亚基结合，诱导对mRNA模板的错读且抑制易位，从而以阻止蛋白合成。潮霉素B能杀死细菌、真菌和高等真核细胞。主要用来筛选和维持培养稳定转染Hph载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞)。
对潮霉素B(Hygromycin B)的抗性来源于大肠杆菌潮霉素抗性基因(hph或hyg)，该基因能编码潮霉素磷酸转移酶(hygromycin phosphotransferase)，使得潮霉素B发生磷酸化从而失去活性。目前Hph抗性基因主要有两种来源，zui初来源是大肠杆菌(Escherichia coli)，另一来源是潮霉素B产生菌吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。如今，携带Hph抗性的载体大多来自大肠杆菌。
