waters液相色谱仪测定大豆胚轴中单糖链大豆皂甙的含量

　　一、waters液相色谱仪和试剂
检测单元为Waters液相色谱仪是非常灵活的HPLC系统，包WatersTM 717 plus自动进样器；Waters 600E控 制单元；WatersTM 805数据 处理机和 Waters 2410差示折光仪。液相色谱用试剂为色谱纯。
二、色谱条件
色谱柱为 ODS-AM一303柱 （YMC，4．6 mm×250 mm，5肚m），柱温 40℃，流动相为含 0．1  三氟已酸的乙腈 一水 （40：60，v／v），流速1 mL rain～，高纯氦气脱气 ，进样量 10 L，分析时间为 45 rain。
三、标样配制
大豆皂甙标准品，实验室自行制备，通过 IR、FAS-MS、 H—NMR和”C_NMR鉴定 ，液相色谱分析为单一峰。称取Ba和Bb、Bd和Be、ag和Dg标准品 ，加甲醇溶解定容至 10 mL，分别配成浓度为0．561和 0．588、0．396和 0．503、0．344和 0．406 mg
mL叫的溶液，作为对照品溶液。分别吸取标准品液10 L，供 HPLC分析。
四、试样制备
大豆冷冻干燥后剥离胚轴 。将 3 kg大豆胚轴研磨粉碎 ，用15 L 50甲醇常温提取 ，提取液经喷雾干燥得粗粉 562 g。将粗粉用等体积正丁醇一水溶液萃取，取正丁醇层，经减压蒸馏、冷冻干燥，得总糖甙 223 g。
五、测定
称取总糖甙 0．1 g，用甲醇定容至50 mL，以Milipore FH  0．5肚m过滤膜过滤后作为样品供试液。分别吸取供试液 1O L，供 HPLC分析。
六、结论
建立了大豆胚轴中单糖链大豆皂甙的液相色谱测定方法。采用差示折光检测法，结果峰面积值和进样量之间呈良好的线性关系 ，用于单糖链大豆皂甙的分析中优于紫外检测法。所建立的检测方法灵敏度、重现性均能满足一般分析要求 ，可用于大豆皂甙样品中其它大豆皂甙的分析中。