液相色谱柱的使用和维护注意事项

液相色谱柱的使用和维护注意事项

液相色谱柱的使用和维护注意事项

色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效缩短使用寿命甚至损坏在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱

避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)

.应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然

一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质否则反冲会迅速降低柱效

选择使用适宜的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶"饱和"，避免分析柱中的硅胶基质被溶解

经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml

下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正已烷(或庚烷)二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化反相柱以水甲醇乙腈一氯甲烷(或)依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗如果下一步分析用的流动相不含缓冲液，那么可以省略最后用水冲洗这一步一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，在甲醇(乙腈)冲洗时重复注射100~200µl*数次有助于除去强疏水性杂质*与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂有时也注射二甲亚砜数次此外，用乙腈和三fu醋酸(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐，然后用水甲醇二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有机物)甲醇水依次冲洗

保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥禁止将缓冲溶液留在柱内静置至第二天或更长时间

色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大在后两种情况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取净)再把柱内填料整平然后用适当溶剂湿润的固定相(与柱内相同)填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复到新柱的水平柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱(5~30mm)，可以起到保护延长柱寿命的作用采用保护柱会损失一定的柱效，这是值得的 通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上以硅胶为基质的填料，只能在pH2~9范围内使用柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复每次工作完后，用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗含卤族元素(fu氯溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟