如何对液相色谱仪的分离条件进行优化？

液相色谱仪利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC）及液-固色谱(LSC）。对高沸点、难气化合物的混合物通过色谱柱和淋洗剂并以实现分离。系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。在该仪器的使用中，应对其分离条件进行优化。


    如何对液相色谱仪的分离条件进行优化？
    1、减少色谱柱柱内展宽，提高柱效
  （1）流速：从H-U曲线可知，HPLC的******流速在流速很小处，减少流速有利于提高柱效，但在实践中为加快分析速度，常采用比******流速高数倍的流速。
    （2）流动相：选用低粘度的流动相，有利于增大液相色谱仪分析样品组分在溶剂中的扩散系数Dm，减少传质阻力。
  （3）色谱柱柱温：适当提高液相色谱仪柱温，可降低流动相粘度，减少传质阻力，但柱温升高将使分辨率降低，柱寿命短，易产生气泡，一般在室温下进行。
    （4）固定相：
     ①粒度小，均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力；
     ②改进结构，尽可能采用大孔径和浅孔道的表面多孔型载体或全多孔微粒型载体，减少滞留流动相传质阻力。
  2、色谱柱柱外展宽
   色谱柱柱外谱带展宽又称“柱外效应”，系指从液相色谱仪进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起的色谱峰展宽，色谱柱柱效下降。可分为：
  （1）色谱柱柱前展宽  主要由进样引起，减小进样器的死体积，用阀门进样可减少柱前谱带展宽，提高柱效。
    （2）色谱柱柱后展宽  主要由接管、检测器流通池体积及检测器响应时间等因素所引起。因此，尽可能用短而内径细的接管，减少流通池体积，改进液相色谱仪检测器和记录系统的响应速度等都是克服柱后展宽的途径。
分析结束后反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染或堵塞。


    注：液相色谱仪由高压、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。应用于生物化学、生物医学、环境化学、石油化工等部门。
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